Biolabs نیوانگلند (NEB^®) امروز از راه اندازی کیت NEBNext Enzymatic 5hmC-seq (E5hmC-seq) خبر داد.^™)، یک روش جدید مبتنی بر آنزیم برای تشخیص خاص سایت‌های 5hmC. رویکرد ملایم و مبتنی بر آنزیم، بازدهی بالا و داده‌های با کیفیت بالا را با محدوده ورودی 100 pg تا 200 ng امکان‌پذیر می‌سازد.

در حالی که اهمیت بیولوژیکی اصلاح 5 میلی‌سی‌سی کمتر از 5 میلی‌سی‌سی‌سی است، فراوانی 5 میلی‌سی‌سی‌سی سانتی‌گراد به طور قابل‌توجهی بین بافت‌ها متفاوت است، که نشان می‌دهد ممکن است نقش مهمی در تنظیم ژن و سایر فرآیندهای بیولوژیکی داشته باشد.

فیونا استوارت، معاون مدیر مدیریت پورتفولیو NEBNext گفت: «تاکنون، مطالعه 5 میلی‌سی‌سی‌سی به دلیل نبود روش‌های تشخیص دقیق با مشکل مواجه شده است. در حالی که NEBNext Enzymatic Methyl-seq (EM-seq^™استاندارد طلایی ما برای تشخیص متیلاسیون، 5mC و 5hmC را تشخیص می دهد، بین آنها تمایز قائل نمی شود. علاوه بر این، روش‌های مبتنی بر بی سولفیت به دلیل قطعه قطعه شدن نمونه و از دست دادن DNA که در نتیجه درمان آسیب‌رسان بی سولفیت ایجاد می‌شود، از کیفیت داده‌های کاهش یافته رنج می‌برند، در نتیجه کاربرد عملی آنها را محدود می‌کند.

استوارت گفت: «برای رسیدگی به این چالش‌ها، کیت NEBNext Enzymatic 5hmC-seq را توسعه دادیم که امکان تشخیص خاص سایت‌های 5hmC را با استفاده از یک گردش کار تبدیل آنزیمی دو مرحله‌ای فراهم می‌کند. روش آنزیمی آسیب DNA را به حداقل می‌رساند و اجازه می‌دهد تا 5 میلی‌سی‌سی‌توزین از سیتوزین اصلاح‌نشده و 5 میلی‌سی‌سی‌سی‌سی‌توزین پس از ایلومینا تشخیص داده شود.^® ترتیب دهی. علاوه بر این، داده های E5hmC-seq را می توان از داده های EM-seq کم کرد، که امکان تعیین دقیق مکان های 5mC و 5hmC را فراهم می کند.

این کیت شامل معرف های مورد نیاز برای تبدیل E5hmC-seq و آماده سازی کتابخانه سازگار با توالی یابی Illumina است. آغازگرهای شاخص برای مالتی پلکسی به طور جداگانه در دسترس هستند. یک ماژول تبدیل نیز در دسترس است، برای برنامه های کاربردی فراتر از آماده سازی کتابخانه.

برای اطلاعات بیشتر، به www.NEBNext.com مراجعه کنید.